Evaluation of two Taenia solium cysticercal antigenic preparations (vesicular fluid and a glycoprotein fraction with affinity for lentil lectin) for the immunodiagnosis of neurocysticercosis by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) / Avaliação de duas preparações antigênicas de cisticercos de Taenia solium (líquido vesicular e uma fração glicoprotéica com afinidade para lentil lectina) para o imunodiagnóstico da neurocisticercose usando uma técnica imunoenzimática (ELISA)

OBJECTIVE: To evaluate the performance of two antigenic preparations (vesicular fluid - VF and a glycoprotein fraction, LLa-Gp fraction, purified from a whole parasite extract by lentil lectin affinity chromatography) from Taenia solium cysticerci for the immunodiagnosis of neurocysticercosis. METHOD: Fifty-six cerebrospinal fluid (CSF) samples (22 from patients with neurocysticercosis and 34 from patients with other neurological disorders) and 57 serum samples (22 from patients with neurocysticercosis, 18 from patients with other infections and 17 from presumably healthy persons) were assayed for anticysticercal IgG antibodies with an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). RESULTS: The VF ELISA showed 100 percent sensitivity and specificity in CSF and serum samples, whereas the sensitivity and specificity of the LLa-Gp ELISA were, respectively, 90.9 percent and 97.1 percent, with the CSF samples and 95.5 percent and 100 percent with serum samples. There was no significant difference in the sensitivity and specificity of the two antigenic preparations used to screen CSF and serum samples. CONCLUSION: Considering the complexity and high cost of obtaining the LLa-Gp fraction, VF could be more suitable for screening specific antibodies by ELISA in CSF and serum samples from patients with neurocysticercosis.

OBJETIVO: Avaliar o desempenho de duas preparações antigênicas (líquido vesicular - LV e uma fração glicoprotéica, fração LL a-Gp, purificada do extrato total dos parasitas por cromatografia de afinidade com lentil lectina) de cisticercos de Taenia solium para o imunodiagnóstico da neurocisticercose. MÉTODO: Cinquenta e seis amostras de líquido cefalorraquidiano (LCR) (22 de pacientes com neurocisticercose e 34 de pacientes com outras doenças neurológicas) e 57 amostras de soro (22 de pacientes com neurocisticercose, 18 de pacientes com outras infecções e 17 de pessoas presumivelmente sadias) foram analisadas quanto à presença de anticorpos IgG anti-cisticercos com uma reação imunoenzimática (ELISA). RESULTADOS: A reação ELISA LV apresentou 100 por cento de sensibilidade e especificidade em amostras de LCR e soro, enquanto a sensibilidade e a especificidade da reação ELISA LLa-Gp em amostras de LCR e soro foram de 90,9 por cento e 97,1 por cento e 95,5 por cento e 100 por cento, respectivamente. Não foram encontradas diferenças significativas na sensibilidade e especificidade das duas preparações antigênicas utilizadas, tanto para amostras de LCR como para amostras de soro. CONCLUSÃO: Considerando a complexidade e o alto custo de obtenção da fração LLa-Gp, o LV pode ser mais adequado para a pesquisa de anticorpos específicos por ELISA em amostras de LCR e soro de pacientes com neurocisticercose.

Evaluation of an enzyme immunoassay for clinical diagnosis of neurocysticercosis in symptomatic patients / Avaliação de um teste imunoenzimático para o diagnóstico clínico de neurocisticercose em pacientes sintomáticos

INTRODUCTION: Neurocysticercosis is an infection of the human central nervous system caused by the metacestode larvae of Taenia solium. Neurocysticercosis is the most common parasitic disease in developing countries. Epilepsy is the most common clinical manifestation. Difficulties in confirming the diagnosis motivated the evaluation of the enzyme-linked immunosorbent assay on cerebral spinal fluid (CSF). METHODS: Twenty-two patients with NCC and 44 control patients were studied. CSF was analyzed using a commercial ELISA kit developed for NCC. Sensitivity and specificity were measured and a multivariate logistic regression was performed. RESULTS: Sensitivity and specificity of ELISA were 31.8 percent and 100 percent, respectively, with accuracy of 77.3 percent. Only the size of the lesions proved to be important for performance of the test. CONCLUSIONS: The results showed that ELISA contributes to the diagnosis of neurocysticercosis if the result is negative or if the patient has a lesion of 2 cm or more.

INTRODUÇÃO: Neurocisticercose é a infecção do sistema nervoso central causada pela larva metacestódea da Taenia solium. Neurocisticercose é a parasitose mais comum nos países em desenvolvimento. Epilepsia é a sua manifestação clínica mais comum. A dificuldade para confirmar o diagnóstico motivou a avaliação do ensaio imunoenzimático ligado à enzima no líquido cérebro-espinhal. MÉTODOS: Vinte e dois pacientes com NCC e 44 pacientes controles foram estudados. Líquido cérebro-espinhal foi analisado por um kit ELISA comercial desenvolvido para NCC. A sensibilidade e especificidade foram medidas e uma análise multivariada de regressão logística foi realizada. RESULTADOS: A sensibilidade e a especificidade de ELISA foram, respectivamente, 31,8 por cento e 100 por cento, com acurácia de 77,3 por cento. Apenas o tamanho das lesões mostrou-se importante para o desempenho do teste. CONCLUSÕES: Este estudo concluiu que ELISA contribui para o diagnóstico de NCC, caso o teste seja negativo ou caso o paciente seja portador de lesão cuja dimensão seja igual ou maior que dois centímetros.

Detection of Cysticercus antigens and antibodies in cerbrospinal fluid of patients with chronic meningitis

Chronic meningitism is a less frequent manifestation of neurocysticercosis caused by Taenia solium cysticerci. In the present study we used Co-agglutination (Co-A), a simple and rapid slide agglutination test to detect specific Cysticercus antigen in the 67 cerebrospinal fluid (CSF) samples from patients with chronic meningitis of unknown etiology. The results were compared with that of ELISA for detection of antibodies. Among these samples four (5.97 percent) were positive for Cysticercus antigen by Co-A test and six (8.95 percent) were positive for antibodies by ELISA. Two samples were positive by both Co-A and ELISA, two were positive only by Co-A and four were positive only by ELISA. In the present study, although Cysticercus antigen and antibodies were present in CSF samples from eight (11.94 percent) patients, we cannot affirm that all the cases of chronic meningitis are due to cysticercosis, but for any case of chronic meningitis of unknown origin, it would be useful to consider the possibility of cysticercal meningitis.

Meningite crônica é manifestação pouco freqüente de neurocisticercose causada por cisticerco de Taenia solium. No presente estudo utilizamos co-aglutinação (Co-A) um teste simples e rápido de aglutinação para detectar antígeno específico de Cysticercus nas 67 amostras de fluido cerebrospinal (CSF) de pacientes com meningite crônica de etiologia desconhecida. Os resultados foram comparados com os de ELISA para detecção de anticorpos. Dentre estas amostras quatro (5,97 por cento) foram positivas para antígenos de Cysticercus pelo teste Co-A e seis (8,95 por cento) foram positivas para anticorpos por ELISA. Duas amostras foram positivas por ambos Co-A e ELISA, duas foram positivas somente por Co-A e quatro foram positivas somente por ELISA. No presente estudo embora antígenos e anticorpos de Cysticercus estivessem presentes nas amostras de CSF de oito pacientes (11,94 por cento), não podemos afirmar que todos os casos de meningite crônica sejam devidos à cisticercose, mas para qualquer caso de meningite crônica de origem desconhecida seria útil considerar a possibilidade de meningite por cisticerco.

Taenia solium metacestode immunodominant peptides recognized by IgG antibodies in cerebrospinal fluid and serum paired samples from patients with active and inactive neurocysticercosis

The aim of this study was to test if serological distinction between patients with active and inactive neurocysticercosis (NCC), could be accomplished by the recognition of immunodominant peptides in total saline antigenic extract of Taenia solium metacestodes by IgG antibody in cerebrospinal fluid (CSF) and serum paired samples. CSF and serum samples of 10 each, active NCC patients, inactive NCC, and individuals with other neurological disorders, were used to recognize the antigenic peptides by western blot (WB). In the active NCC the 28-32 and 39-42 kDa peptides were more frequently detected in CSF than in sera (p < 0.05). The 47-52, 64-68, and 70 kDa antigens showed high frequencies in both samples from patients with active NCC. All the CSF samples of inactive NCC and other neurological disorder (control) patients tested negative, while serum samples from these last two groups recognized mainly the 80, 86, 95, and 98 kDa bands. This finding eliminates the use of the high molecular weigh bands (> 80 kDa) for diagnosis of NCC. The final conclusions were that the difference between active and inactive NCC may be done with the detection of peptides only in the CSF samples and that the 47-52, 64-68, and 70 kDa bands may be included as specific markers for active NCC when detected in CSF samples by WB using total saline extract of T. solium metacestode.

Use of the paired samples (cerebrospinal fluid and serum) in immunodiagnostic of active and inactive human neurocysticercosis

Paired samples of cerebrospinal fluid (CSF) and serum of 30 patients - 10 with active, 10 with inactive neurocysticercosis (NCC), and 10 control subjects - were evaluated by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) using two Taenia crassiceps metacestode extracts as antigen in order to detect IgG antibodies. In active NCC, high levels of IgG were detected (p < 0.05). The CSF samples showed 80 percent (CI 72-88) of reactivity in the saline extract (S) and 90 percent (CI 84-95) in sodium dodecyl sulphate (SDS) and the serum samples were reactive in 90 percent (CI 84-95) and 100 percent (CI 98-100) in the S and SDS antigenic extracts, respectively. The use of the paired samples of CSF and serum in active NCC showed equivalent results suggesting that the serum samples could be used as a screening in those patients whose CSF puncture is counter-indicated.

Comparaçäo entre os testes de eritroimunoadsorçäo por captura, imunoenzimático e hemaglutinaçäo passiva utilizados no diagnóstico da neurocisticercose / Comparison of the erythroimmunoadsorption by capture, immunoenzymatic and passive haemagglutination tests used in the diagnosis of neurocysticercosis

Foi realizada a comparaçäo entre os testes de eritroimunoadsorçäo por captura (EIAC), imunoenzimático (ELISA) e de hemaglutinaçäo passiva (HAP) utilizados no diagnóstico da neurocisticercose. Foram comparados dois testes já anteriormente utilizados na rotina diagnóstica da neurocisticercose (ELISA E HAP) e um recentemente pradonizado (EIAC) para a detecçäo de anticorpos anti-Cysticercus cellulosae. O antígeno empregado nos três testes foi o extrato salino bruto (ESB), com um rendimento de 0,1; 1 e 1micrag proteína/cavidade para os testes EIAC, ELISA e HAP, respectivamente. Quando se analisou em grupo de 58 pacientes com neurocisticercose, a sensibilidade observada foi de 98,2 porcento, 84,5 porcento e 77,2 porcento nos testes ELISA, EIAC e HAP, respectivamente, para um grupo controle de 85 indivíduos, saudáveis ou com outras encefalotipatias, mas sem neurocisticercose, a especificidade foi de 94,1 porcento, 95,3 porcento, 91,8 porcento respectivamente, nos testes. Esta ordem de escolha poderia ser obedecida na medida dos recursos disponíveis

Imunodiagnóstico da neurocisticercose: estudo comparativo entre uma técnica baseada na utilizaçäo de um conjugado contendo lectina com afinidade para eritrócitos (Erythro-Lit) e uma técnica imunoenzimática (Elisa) / Immunodiagnosis of neurocysticercosis: a comparative study between a technique utilizing a conjugate containing lectin with affinity for erythrocytes (Erythro-lit) and a immunoenzymatic assay (Elisa)

Uma técnica baseada na utilizaçäo de um conjugado contendo lectina (aglutinina de germe de trigo) com afinidade para eritrócitos (Erythro-lit) foi utilizada com o objetivo de pesquisar anticorpos anti-Cysticercus cellulosae em líquidos cefalorraquianos de pacientes com neurocisticercose. Em uma avaliaçäo comparativa entre a técnica Erythro-lit e uma técnica imunoenzimática (Elisa) para o imunodiagnóstico da neurocisticercose, näo foram observadas diferenças significativas com relaçäo às sensibilidades e especificidades das duas técnicas. A necessidade mínima de equipamentos, a alta sensibilidade, a simplicidade e baixo custo, fazem da técnica Erythro-lit um método laboratorial de grande utilidade para o imunodiagnóstico da neurocisticercose

Utilizaçäo do teste de eritroimuadsorçäo por captura no imunodiagnóstico da neurocisticercose / Capture erytroimmunodsorption test for neurocysticercosis immunodiagnosis

Foi padronizado o teste de eritroimunoasorçäo por captura (EIAC) para detecçäo de anticorpos específicos anti-cisticercos de Taenia solium, classe IgG, no líquido cefalorraquidiano (LCR) de pacientes com neurocisticercose. O reagente empregado para detecçäo de anticorpos específicos foi preparado com hemácias de carneiro em uma concentraçäo de 0,25 por cento, sensibilizadas com antígeno extrato salino bruto (ESB) obtido do Cysticercus cellulosae. A concentraçäo ótima de ESB para sensibilizaçäo das hemácias de carneiro foi de 40ug/ml. O rendimento do ESB foi de 0,1ug proteína/cavidade. A sensibilidade do teste foi de 84,5 por cento (limite de confiança 95 por cento de 75 por cento a 94 por cento), quando aplicado a 58 amostras de LCR de pacientes com neurocisticercose; e a especificidade foi de 95,3 por cento (limite de confiança 95 por cento de 90,7 por cento a 99,9 por cento) quando 85 amostras de LCR do grupo controle foram analisadas. O teste EIAC foi eficiente para o diagnóstico da neurocisticercose, e é importante para os laboratórios de saúde pública, tendo em vista a fácil execuçäo, alto rendimento e baixo custo

Cysticercosis of the central nervous system and cerebrospinal fluid: immunodiagnosis of 1573 patients in 63 years (1929-1992)

A atençäo dada à profilaxia da neurocisticercose (NC) encontra-se aquém do mínimo necessário em várias regiöes do terceiro mundo, motivo pelo qual nelas a incidência da doença continua alta. Esta investigaçäofoi feita para mostrar a importância do problema pela análise da incidência da NC em uma regiäo do Brasil (Säo Paulo). Para tanto foram considerados os dados de um laboratório de neurodiagnóstico em que o imunodiagnóstico de NC é baseado na detecçäo de anticorpos a Cysticereus cellulosae no líquido cefalorraqueano (LCR). Os casos estudados no período de 63 anos (1929-1992) säo revistos. O número de casos nesse período foi 139.000, o diagnóstico sendo NC em 1.573 deles (1,13//). Näo foram encontradas características especiais de prevalência para cor e idade. A prevalência quanto a faixa etária se encontra entre 21 e 40 anos de idade (55,3//), sendo maior para mulheres entre 21 e 30 anos de idade e, para homens entre 31 e 40. A distribuiçäo dos casos em 5 décadas consecutivas (1942-1991) näo mostra tendência a decréscimo: a incidência média foi 1// para os 50 anos, encontrando-se acima da média a incidência nas 3 últimas décadas. Esses dados confirmam que a incidência se mantém expressivamente alta nos 50 anos abrangidos pelo estudo

Dot-elisa for detection of anti-Cysticercus cellulosae antibodies in human cerebrospinal fluid using a new solid-phase (resin-treated polyester fabrics): preliminary report

Foi desenvolvido o teste DOT-ELISA em tecido de poliéster tratado com resina polimerizada(NMA) para o imunodiagnóstico da neurocisticercose (NC) humana pesquisando anticorpos específicos em líquido cefalorraquiano (LCR). O teste pode ser empregado em levantamentos epidemiológicos e em laboratórios de média e baixa complexidade, já que todas as etapas säo realizadas a temperatura ambiente, o antígeno é covalentemente ligado ao suporte permitindo obter um reagente estável, e o suporte sensibilizado näo requer cuidados especiais no seu manuseio. Foram ensaidas 30 amostras de LCR; todas as 15 amostras do grupo controle foram negativas e 14 (93,3%) das 15 amostras de LCR do grupo de pacientes com NC foram positivas (títulos de 1 a 128). Os estudos de sensibilidade, especificidade, reprodutibilidade, establidade e padronizaçäo do uso de soro como amostra estäo em andamento

Esquistossomose do sistema nervoso central: relato de um caso / Schistosomiasis of the central nervous system: report of a case

O comprometimento do sistema nervoso na esquistossomose mansônica é evento raramente diagnosticado na evoluçäo desta parasitose. Os autores descrevem o caso de uma paciente de 23 anos, natural de Säo Francisco-MG, que apresentava há duas semanas quadro de cefaléia, vômitos em jato, febre e sonolência: o exame neurológico mostrava rigidez de nuca, paresta com hipertonia muscular bilateral em membros superiores, perda de motricidade e sensibilidade em membros inferiores. Näo se palpava hepato-esplenomegalia. O exame do líquido cefalorraquidiano (LCR) mostrou hipoglicorraqui (28 mg%), hiperproteinorraquia (113 mg%) e pleocitose acentuada (949 células/mm**3), com predomínio de neutrófilos (70%), além de eosinofilorraquia (9%). A reaçäo de imunofluorescência indireta para esquistossomose, no LCR, realizada em cortes de fígado com granuloma peri-ovular foi reagente (IgG: 1/16; IgM: 1/4). As pesquisas de fungos e b.a.a.r. no LCR, assim como a cultura para b.a.a.r. (apóos 60 dias) e as reaçöes imunológicas para neurocisticercose foram negativas. Uma tomografia computadorizada do cérebro e medula espinhal näo evidenciou anormalidades. No exame parasitológico das fezes foi identificada a presença de ovos viáveis de S. mansoni. Instituiu-se tratamento com corticóides e praziquantel (60 mg/kg/dia; 7 dias) tendo havido regressäo das alteraçöes do LCR, permanecendo entretanto seqüelas neurológicas graves (paraplegia e bexiga neurogênica)

Teste imunoenzimático para pesquisa de anticorpos anti-Cysticercus cellulosae em líquidos cefalorraquianos de pacientes com meningites de etiologia indeterminada / Immunoenzymatic test for the detetion of antbodies anti-Cysticercus cellulosae in cerebrospinal fluid of patients with meningitis of unknown etiology

Foi empregado o teste de imunoezimático com componentes antigênicos de cysticercus cellulosae quimicamente ligados a suporte inerte constituído por discos de tecido-resina, ELISA-d, com finalidade de investigar a entidade neurocisticercose (NC) em líquidos cefalorraquianos (LCR) de pacientes com meningites de etiologia indeterminada. foram ensaiados 277 LCR de 128 crianças e 149 adultos. A densidade óptica média (DO) obtida para os 22 LCR de pacients nos quais foi afastada a possibilidade diagnóstica de meningite foi de 0,03. Os 44 LCR de pacientes com meningites determinadas por diversos agentes etiológicos, näo cisticercose, apresentaram DO de 0,05. o limiar de reatividade do teste ELISA-d calculado a partitr desses dois grupos (controle) doi de 0,13 (DO + 3SD). No grupo de 13 LCR de pacientes com NC comprovada em episódio meningítico por essa causa, foi observada DO de 0,41 a 0,91) no teste ELISA-d. Dos 198 LCR de meningites por agente etiológico näo identificado pelos métodos usualmente empregados, 23(11,6%) apresentaram DO acima de 0,13, sugerindo que a possível causa de meningite tenha sido por cisticercose, uma vez que o teste ELISA-d tem apresentado elevadas sensibilidade, especificidade e reprodutibilidade. Em cinco dos 23 LCR a alteraçäo no exame quimiocitológico era às custas do aumento do número de células predominantemente linfomononucleares, em 13 o predomínio era de polimorfonucleares e nos cinco restantes ambos os tipos de células estavam em número aumentado

Avaliaçäo de fraçoes antigênicas de Cysticercus cellulosae para o imunodiagnóstico da neurocisticercose utilizando conjugados anticorpos lectina / Evaluation of antigenic fractions from Cysticercus cellulosae for immunodiagnosis of neurocysticercosis using antibody-lectin conjugates

Um extrato bruto de Cysticercus cellulosae foi fracionado por cromatografia em coluna de Sephadex G-200, com o objetivo de se encontrar alguma fraçäo com alta atividade antigência para ser utilizada no imunodiagnóstico da neurocisticercose. O perfil de eluiçäo proteico da cromatografia revelou dois picos distintos (fraçöes I e III) e, entre os dois uma fraçäo bastante heterogênea composta de vários picos (fraçäo II). Uma técnica baseada na utilizacäo de conjugados contendo lectina con afinidade para eritrócitos (Erythro - LIT) foi utilizada para a avaliaçäo das fraçöes. Os títulos de Erythro-LIT obtidos com o extrato bruto de cisticercos e com as fraçöes mostraram que a maior parte dos anticorpos anti Cysticercus cellulosae, presentes em amostras de líquido cefalorraqueano de pacientes com neurcisticercose, reconheceram componentes antigênicos da fraçäo II

Erythro-Lectin Immuno Test (Erythro-LIT) in the immunodiagnosis of neurocysticercosis

1. The effectiveness of the Erythro-Lectin Immuno Test (Erythro-LIT) to detect anticysticercus antibodies was tested using cerebrospinal fluid (CFS) from patients with neurocysticercosis. 2. Both Erythro-LIT and complement fixation (CF) were used to detect antibodies in 36 CSF samples from cysticercotic patients. Erythro-LIT detected anticysticercus antibodies in 35 CSF samples (97%) and CF in 26(72%). The antibody titers ranged from 1:4 to 1:4096 for Erythro-LIT (mean geometric titer = 282.65) and 1:1 to 1:64 in CF (mean geometric titer = 7,92). 3. When > 1:16 Erythro-LIT was used as a significant diagnostic cut-off value, the sensitivity and specificity of Erythro-LIT were 92% and 100%, respectively, for CFS. 4. The high sensitivity and specificity demonstrated here, together with the simplicity and low cost of the test, make the Erythro-LIT a potentially useful method for screening for specific antibodies in neurocysticercosis